Indholdsfortegnelse:

Sådan fungerer digital PCR
Sådan fungerer digital PCR
Anonim

Der er så meget at vide, når man diskuterer alt relateret til digital polymerasereaktion. Digital PCR anvendes ofte i klinisk biologi som en kritisk faktor i laboratoriemiljøet. Det har mange fordele sammenlignet med kvantitativ PCR, som omfatter mange facetter af prøvetestapplikationer.

PCR-opfindelsen går tilbage til 1980'erne, og siden da har påvisning af mikrobiologiske midler aldrig været nemmere. Avanceret mikrobiologisk forskning har været ført i spidsen af ​​denne teknologi i lang tid, hvilket gør den til det bedste værktøj til fremskridt på det kliniske område.

PCR er nu tilgængelig i stort set alle kliniske laboratorier verden over med dedikerede instrumenter til omfattende facilitering af funktioner. Den digitale polymerasekædereaktion kan virke kompleks, og det er den, men det hele handler om at opdele den i de flere sektioner, der byggede den op til, hvad den er.

Sådan fungerer digital PCR

At forstå, hvordan dPCR virker, er afgørende for alt klinisk personale, som bliver nødt til at bruge det i deres mikrobiologiske karriere. Begge metoder, der anvendes i qPCR og dPCR, gælder, når man ser på den kemiske reaktion, der finder sted under processen.

dPCR er allerede kendt for at have en masse fordele, når det kommer til forbedrede resultater. Anvendelsen af ​​systemer, der er meget følsomme og kræver meget nøjagtig kvantificering, har blandt andet vist sig at være bedre gennem brug af dPCR-metoder.

Der er et par trin, der får dPCR-systemet til at fungere. Disse er vigtige for succesfuldt at anvende systemets funktionalitet og få de ønskede kvantitative resultater på projektanalysen.

dPCR-systemer, der er kommercielt tilgængelige, er certificerede, og du kan forespørge fra pålidelige kilder om de bedste at overveje. PCR-processerne tager sigte på at detektere og kvantificere specifikke nukleinsyrekomponenter i kliniske prøver fra ethvert laboratorium.

dPCR og qPCR har deres forskelle, og det er ret spændende, hvordan de producerer resultater fra reaktionsprocesserne involveret i systemerne. Den tilgang, som dPCR tager, er med hensyn til kvantificeringen af ​​DNA-molekylenumrene i en specifik prøve under eksperimentel analyse.

DNA-amplifikationsreaktionen er inkluderet i de fluorescerende farvestoffer i qPCR, men dPCR har tusindvis af opdelinger af specifikke uafhængige dele. Opdeling af dem i sektioner kan ses gennem kapillærer eller endda mikrobrøndsplader med individuelle reaktionsblandinger med enkelte molekyler.

dPCR-applikationer i klinisk mikrobiologi

dPCR ser ud til at være kernen i klinisk mikrobiologitestning, hvor reaktionerne udnyttes gentagne gange til at producere måder til at opnå præcise resultater. Standarderne for den absolutte kvantificering af dPCR er baseret på høj standard kalibrering og effektiv amplifikation af hele processen.

De førsteklasses systemer er perfekte til brug ved bestemmelse af belastninger af et bestemt patogen, kvantificering af mål med mangfoldighed i deres sekvenser og prøver med inhibitorer. Brugen af ​​digital PCR har også gjort det muligt at bestemme kopiantal af både RNA- og DNA-vira, parasitter og endda bakterier i stort set alle kliniske prøver.

Mutationer er et vigtigt område ved anvendelse af dPCR gennem dets detektionsevner med vildtypesekvenser under processen. Detektionsresultater ved hjælp af qPCR kan ikke sammenlignes med dPCR, da qPCR har vist sig kun at detektere op til et maksimum på 10% af enhver mutant allel. På den anden side fungerer dPCR langt bedre end at detektere mutanter inden for tusindvis af vildtype KRAS-gener.

Implementeringsovervejelser

Det er vigtigt først at overveje, hvad der gør dPCR-implementering sandsynlig, og i hvilke omgivelser der bedst udføres. Det er nu tydeligt, at sammenlignet med qPCR har dPCR mere specifikke fordele, og derfor er implementering af dPCR i laboratorierne meget sandsynlig.

Implementeringsprocedurer bør også tage højde for de situationer, hvor det er klart, at ydeevnen af ​​dPCR er bedre end qPCR. At have en højpræcisionsproces til måling af viral belastning er vigtigt for at finde resultater, som nogen kan være sikker på og ikke blande det sammen med andre værdier, som ville påvirke hele integriteten af ​​hele kædereaktionen.

Den høje ydeevne bruges også til at amplificere konsensusmål ved brug af konsensusprimer, prøvetestning med inhibitorer, blandt andet for at give mere præcise og nøjagtige resultater. Det anbefales altid at bruge dPCR til karakteriseringsstandarder for qPCR-assays. Stilla Technologies er en af ​​de nuværende firmaer, der går i spidsen for brugen af ​​denne teknologi til næste niveau.

Fremskridt inden for digital PCR-teknologi er et perfekt valg blandt dets forskellige anvendelser inden for klinisk mikrobiologi. Det har sin rimelige andel af minimale ulemper. Den kompleksitet, det medfører, sammen med de almindelige præcise reaktioner, det gennemgår, giver det alle de fordele og den højere ydeevne, som intet system kan slå i øjeblikket.

Efterhånden som den kliniske teknologi udvikler sig, vil begrænsningerne blive løst med en ny generation af udviklede instrumenter til at revolutionere hele den kliniske industri. For øjeblikket er det klart, at brugen af ​​dPCR-systemer vil være normen i mikrobiologiske diagnostiske laboratorier globalt.

Populær af emne.